技术及案例
产品介绍
改造: 以枯草芽孢杆菌为底盘细胞 ,利用CRISPR-dCas9介导的转录调控与代谢工程策略,构建核黄素高产菌株。
途径: 应用CRISPR-dCas9技术,针对枯草芽孢杆菌核黄素合成途径关键基因(ribG、ribA、ribH)及调控因子purR,分别构建RBS文库进行高通量筛选或实施基因敲除(KO),以定向优化其表达水平。同时,过表达葡萄糖-6-磷酸脱氢酶(G6PDH, zwf 基因产物)重构戊糖磷酸途径(PPP)碳流,显著提高核黄素前体核酮糖-5-磷酸(Ru5P)的胞内积累。经上述整合策略优化,所得工程菌株在摇瓶发酵条件下,核黄素产量突破15 g/L。