技术及案例
产品核心技术——基因编辑&高通量表达
改造:以枯草芽孢杆菌为底盘细胞 ,构建核黄素高产菌株。途径: 应用CRISPR-Cas9n对枯草芽孢杆菌中核黄素生产途径基因ribG、 ribA、 ribH/purR进行RBS库的筛选或敲除 , 同时调节优化底盘细胞中核黄素的产量 ,通过过表达葡萄糖-6-磷酸脱氢酶(GAPDH) 来改变戊糖磷酸途径的碳代谢流 ,可以增加核酮糖-5-磷酸(Ru5P) 的胞内积累

产品介绍

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改造: 以枯草芽孢杆菌为底盘细胞 ,利用CRISPR-dCas9介导的转录调控与代谢工程策略,构建核黄素高产菌株。

途径: 应用CRISPR-dCas9技术,针对枯草芽孢杆菌核黄素合成途径关键基因(ribG、ribA、ribH)及调控因子purR,分别构建RBS文库进行高通量筛选或实施基因敲除(KO),以定向优化其表达水平。同时,过表达葡萄糖-6-磷酸脱氢酶(G6PDH, zwf 基因产物)重构戊糖磷酸途径(PPP)碳流,显著提高核黄素前体核酮糖-5-磷酸(Ru5P)的胞内积累。经上述整合策略优化,所得工程菌株在摇瓶发酵条件下,核黄素产量突破15 g/L。




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